產(chǎn)品簡介：

Ø BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)(Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。
Ø 和碧云天生產(chǎn)的普通BCA蛋白濃度測定試劑盒相比，靈敏度更高，檢測濃度下限達(dá)到10微克/毫升，最小檢測蛋白量達(dá)到0.2微克，待測樣品體積為1-20微升。
Ø 和碧云天生產(chǎn)的普通BCA蛋白濃度測定試劑盒相比，顯色速度更快，相同的樣品孵育較短時間即可進行吸光度測定。
Ø 在20-1000微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
Ø BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。不適用BCA法時建議試用碧云天生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)對樣品中各種物質(zhì)的詳細(xì)的兼容性和普通的BCA蛋白濃度測定試劑盒相同，請參考碧云天如下網(wǎng)頁:
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
Ø 每個試劑盒可以檢測500個樣品。



包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

P0010-1
BCA試劑 A
100ml

P0010-2
BCA試劑 B
3ml

P0010-3
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)
30mg

P0010-4
蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液
1.5ml

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說明書
1份





保存條件：

室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。


注意事項：

Ø 需酶標(biāo)儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據(jù)比色皿的最小檢測體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。
Ø 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用碧云天生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø 為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱。
Ø EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用碧云天生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1. 取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。
2. 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20微升 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980微升稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)也可以-20℃長期保存。
3. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml BCA試劑A加100微升BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
4. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20微升。
5. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到20微升。
6. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長孵育時間。
7. 測定A562，540-595nm之間的波長也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。

常見問題：
1. 測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)，詳細(xì)的BCA法的兼容性列表請參考碧云天如下網(wǎng)頁:
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
2. 是否每次測定時都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
1. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue，

β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis.
Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.
注：本研究論文由清華大學(xué)發(fā)表，該雜志2003年的影響因子為4.995 (Impact factor: 4.995)。

2. 劉軍 丁勁 薛采芳 李英輝 宮衛(wèi)東 趙亞 黃豫曉 帶有蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域的靶向核糖核酸酶對乙型肝炎病毒復(fù)制的影響。中華肝臟病雜志2004年第6期第377頁

3. Zhong-shu Liang , Kan Yang and Ben-mei Chen.

Cholesterol in U937 foam cells assayed in liquid chromatographic-mass spectrometry.
Chin J Mod Med; 2004, 14(20): 51-56.

4. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY.
Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells.
Toxicol Appl Pharmacol. 2004 Jan 15;194(2):141-55. (Impact factor: 2.851)

5. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ.
A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres.
Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7. (Impact factor:2.836)

6. Liu MJ, Yue PY, Wang Z, Wong RN.
Methyl protodioscin induces G2/M arrest and apoptosis in K562 cells with the hyperpolarization of mitochondria.

Cancer Lett. 2005, 224:229–241. (Impact factor: 2.614)


7. Liu MJ, Wang Z, Ju Y, Wong RN, Wu QY.
Diosgenin induces cell cycle arrest and apoptosis in human leukemia K562 cells with the disruption of Ca2+ homeostasis.
Cancer Chemother Pharmacol. 2005 Jan;55(1):79-90.(Impact factor: 2.046)

8. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu.
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
World Chin J Digestol. 2005 april 15;13(8):958-962.

9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang.
Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine.
Toxicology Letters 159 (2005) 71–82. (Impact factor: 2.571)

10. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005;13(8):958-962