產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。
Ø 靈敏度更高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25微克/毫升，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5微克，待測(cè)樣品體積為1-20微升。
Ø 在50-2000微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
Ø BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無(wú)EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。不適用BCA法時(shí)建議試用碧云天生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
Ø BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒對(duì)樣品中各種物質(zhì)的詳細(xì)的兼容性，請(qǐng)參考碧云天如下網(wǎng)頁(yè):
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
Ø 每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)5000個(gè)樣品。



包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝

P0011-1
BCA試劑A
500ml/瓶，共2瓶

P0011-2
BCA試劑B
30ml

P0011-3
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)
30mg/管，共2管

P0011-4
蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液
5ml

—
說(shuō)明書(shū)
1份





保存條件：

室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。


注意事項(xiàng)：

Ø 需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
Ø 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺焐�產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
Ø 為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過(guò)熱。
Ø EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉帽淘铺焐�產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0006)。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



使用說(shuō)明：

1. 取1.2ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長(zhǎng)期保存。
2. 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20微升 25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入980微升稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)也可以-20℃長(zhǎng)期保存。
3. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml BCA試劑A加100微升BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
4. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20微升。
5. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到20微升。
6. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時(shí)，或60℃放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
7. 測(cè)定A562，540-595nm之間的波長(zhǎng)也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)，詳細(xì)的BCA法的兼容性列表請(qǐng)參考碧云天如下網(wǎng)頁(yè):
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)锽CA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
1. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue，

β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis.
Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.
注：本研究論文由清華大學(xué)發(fā)表，該雜志2003年的影響因子為4.995 (Impact factor: 4.995)。

2. 劉軍 丁勁 薛采芳 李英輝 宮衛(wèi)東 趙亞 黃豫曉 帶有蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域的靶向核糖核酸酶對(duì)乙型肝炎病毒復(fù)制的影響。中華肝臟病雜志2004年第6期第377頁(yè)

3. Zhong-shu Liang , Kan Yang and Ben-mei Chen.

Cholesterol in U937 foam cells assayed in liquid chromatographic-mass spectrometry.
Chin J Mod Med; 2004, 14(20): 51-56.

4. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY.
Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells.
Toxicol Appl Pharmacol. 2004 Jan 15;194(2):141-55. (Impact factor: 2.851)

5. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ.
A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres.
Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7. (Impact factor:2.836)

6. Liu MJ, Yue PY, Wang Z, Wong RN.
Methyl protodioscin induces G2/M arrest and apoptosis in K562 cells with the hyperpolarization of mitochondria.

Cancer Lett. 2005, 224:229–241. (Impact factor: 2.614)


7. Liu MJ, Wang Z, Ju Y, Wong RN, Wu QY.
Diosgenin induces cell cycle arrest and apoptosis in human leukemia K562 cells with the disruption of Ca2+ homeostasis.
Cancer Chemother Pharmacol. 2005 Jan;55(1):79-90.(Impact factor: 2.046)

8. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu.
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
World Chin J Digestol. 2005 april 15;13(8):958-962.

9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang.
Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine.
Toxicology Letters 159 (2005) 71–82. (Impact factor: 2.571)

10. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005;13(8):958-962