產品簡介：

Ø 碧云天2005年底最新推出的質粒中量抽提試劑盒(Plasmid Midi Preparation Kit)是目前世界上最先進的中抽試劑盒之一。

本產品采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能
將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，12個樣品只需不足60分鐘即可完成。

Ø 改進了整個質粒抽提系統，使本試劑盒的抽提方式更加便捷，抽提質量有了進一步提高。

Ø 質粒純化柱的容量約為50微克。每個純化柱可用于抽提5-10毫升用LB培養過夜的大腸桿菌。抽提所得質粒的OD值一般在1.80左右。所得質粒量會受質粒拷貝數等因素影響，OD值也會因菌種不同等原因而略有波動。

Ø 兩步過柱純化，使質粒純度進一步提高，達到轉細胞級要求。


Ø 無需高速冷凍離心機，只需普通臺式高速離心機。所有操作均可在1.5ml離心管中完成。

Ø 由本試劑盒所得質粒可直接用于轉細胞，DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化。 本試劑盒抽提


的含Firefly luciferase或Renila luciferase報告基因的質粒，用Lipofectmine 2000或Fugene 6轉細胞，報告基因檢測

結果表明僅0.5微克受SV40啟動子控制的質粒轉化12孔板內的一孔原代貼壁細胞，總RLU值約為五百萬，測定時間為10秒。
Ø 內毒素(endotoxin)含量低。用對內毒素敏感的細胞轉染受內毒素響應的報告基因質粒，與Qiagen極其昂貴的Endotoxin Free 大抽試劑盒相比，檢測結果完全一致。




包裝清單：



產品編號 產品名稱 包裝
D0018-1 溶液I (懸浮液) 45 ml
D0018-2 溶液II (裂解液) 45 ml
D0018-3 溶液III (結合液) 60 ml
D0018-4 溶液IV (洗滌液) 36ml (第一次使用前加入54ml無水乙醇)
D0018-5 溶液V (洗脫液) 15 ml
D0018-6 溶液VI (DNA純化結合液) 35 ml
D0018-7 RNase A (100mg/ml) 45微升
— 中抽質粒純化柱 50個
— 廢液收集管 50個
— 說明書 1份




保存條件：

室溫保存，一年有效。



注意事項：


Ø 第一次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加入到溶液I(懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標記，使用后4℃存放。
Ø 第一次使用前在溶液IV(洗滌液)中加入54ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標記。


Ø 溫度較低時，溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。溶液II


請勿過分劇烈混勻，否則會產生大量氣泡。
Ø 溶液II使用完后，一定要蓋緊瓶蓋，防止被空氣中二氧化碳酸化。


Ø 溶液II有強堿性，溶液II和溶液III對人體都有刺激性， 操作時請小心，并注意適當防護。


Ø 本試劑盒所有操作均在室溫進行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。

Ø 廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。


Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1. 取過夜菌至3個1.5毫升離心管中，5000g離心1分鐘收集細菌沉淀，棄上清。再重復一次，每管共收集3毫升過夜菌沉


淀。
通常大腸桿菌宜用LB培養過夜(16小時左右)至OD值為2-4。建議5000g(通常為5000rpm左右)室溫離心1分鐘，如沉淀不充分，

則適當延長離心時間。時間過長或離心速度過快會使沉淀過于緊密，不利于加入溶液I后散開沉淀。直接倒掉上清，再倒入約
1.5毫升菌液并重復上述操作，然后倒置于吸水紙上(可用普通草紙)，使液體流盡。如果細菌密度明顯偏低，可考慮使用更多菌
液，再重復上述操作1-2次。對于高拷貝質粒所用菌量一般不能超過5毫升，對于低拷貝質粒所用菌量一般不能超過10毫升。過
量的細菌會導致后續的裂解不充分。

2. 每管加入250微升溶液I，重懸細菌沉淀。確保沉淀完全散開，無可見細菌團塊。


確認溶液I中已經添加了RNase A。最高速度vortex 5-10秒或更長時間，懸起沉淀。一定要充分混勻，對著光亮處觀察應呈均

勻的懸濁液，無明顯細菌團塊或絮塊。如果沒有vortex，可以用槍吹打沉淀使沉淀逐漸散開或用手指把沉淀彈開。
3. 每管加入250微升溶液II，輕輕顛倒離心管4-6次，使細菌完全裂解，溶液透明。

切勿vortex！vortex或其它劇烈操作會導致基因組DNA斷裂，易導致最終所得質粒被基因組DNA污染。顛倒4-6次后，溶液應變


得透明，無團塊或絮狀物。如果加入溶液I后細菌沒有完全散開，那么顛倒4-6次后，可能還會有團塊或絮狀物。遇到有少量團

塊或絮狀物產生的情況，可以增加顛倒次數3-5次，再室溫放置2-3分鐘，但總裂解時間不可超過5分鐘。

4. 每管加入350微升溶液III，隨即顛倒離心管4-6次混勻，可見白色絮狀物產生。


切勿vortex！顛倒次數也不宜過多，否則易導致最終所得質粒的質量下降。


5. 最高速(13,000rpm左右)室溫離心10分鐘。


離心后會產生白色沉淀。離心時準備好下一步需使用的質粒純化柱，廢液收集管，并在純化柱上做好標記。

6. 將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質粒純化柱內。最高速離心30-60秒，倒棄收集管內液體。再重復兩次，使三管

質粒結合于同一純化柱上。
質粒倒入質粒純化柱后，可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內的液體后，保留收集管繼續使用。


7. 在質粒純化柱內加入750微升溶液IV，最高速離心30-60秒，洗去雜質，倒棄收集管內液體。


加入溶液IV后可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內的液體后，保留收集管繼續使用。


8. 再最高速離心1分鐘，除去殘留液體并使痕量乙醇完全揮發。



注意：倒棄收集管內液體后再離心，才能徹底去除微量的溶液IV。 微量的溶液IV會影響質粒的質量。


9. 將質粒純化柱置于1.5毫升離心管上，加入120微升溶液V至管內柱面上，放置1分鐘。

溶液V需要直接加至管內柱面中央，使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液V沾在管壁上，一定要震動離心管，使液體滑落到管


底，以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ級純水替代溶液V，但是水的pH應不小于6.5。溶液V加入后放置時間稍長，對

于增加質粒產量會略有幫助。
10. 最高速離心1分鐘，所得液體中加入600微升溶液VI，混勻后加到原質粒純化柱內。

加入溶液VI后必須混勻！可vortex或顛倒混勻，混勻后切勿離心。

11. 最高速離心30-60秒，倒棄收集管內液體。

12. 在質粒純化柱內加入750微升溶液IV，最高速離心30-60秒，洗去雜質，倒棄收集管內液體。

加入溶液IV后可以不用等待，直接離心。倒棄收集管內的液體后，保留收集管繼續使用。

13. 最高速再離心1分鐘 ，除去殘留液體并使痕量乙醇完全揮發。
注意： 倒棄收集管內液體后再離心，才能徹底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV會影響質粒的質量。

14. 將質粒純化柱置于1.5毫升離心管上，加入120微升溶液V至管內柱面上，放置1分鐘。

用1.5ml離心管作為收集管。溶液V需要直接加至管內柱面中央，使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液V沾在管壁上，一定要震

動管子，使液體滑落到管底，以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ級純水替代溶液V，但是水的pH應不小于6.5。溶液V
加入后放置時間稍長，對于增加質粒產量會略有幫助。如想得到較高濃度的質粒，可以加入80微升溶液V洗脫。
15. 最高速離心1分鐘，所得液體即為轉細胞級超純質粒。


通常所得質粒濃度為0.1-0.3mg/ml。如果想得到高濃度的質粒，可以采用常規的乙醇沉淀的方法濃縮質粒。