背景知識：
Ø 什么是一氧化氮？為什么要檢測一氧化氮？為什么實際測定的是NaNO2？
一氧化氮（nitric oxide，NO），由一氧化氮合成酶（NO synthase ）合成，是一種非常重要的生理性的細胞內及細胞間的信號分子，在免疫，神經及循環等系統中起著重要作用。大名鼎鼎的“偉哥”就是通過上調一氧化氮而發揮作用的。正因為一氧化
氮如此重要，所以檢測一氧化氮，研究一氧化氮也就變得非常重要。一氧化氮本身極不穩定，目前還沒有很好的辦法直接測定。
NaNO2是一氧化氮代謝形成的一種穩定產物，所以測定NaNO2相當于測定了一氧化氮的累積產量。
Ø 我需要檢測一氧化氮嗎？
如果你想觀察你的刺激（如細胞因子，小分子化合物，紫外線等）對細胞或組織的作用，那你就可以嘗試檢測一氧化氮有沒有變化。如果你手上有疾病或疾病模型的樣品，那你可以檢測病變前后一氧化氮的變化。更多的相似情況就需要你自己去考慮了。

產品簡介：
Ø 碧云天生產的一氧化氮檢測試劑盒采用了經典的 Griess Reagent，并對其測定的溶液體系進行了優化，使檢測下限達到1微摩爾/升，在1-100微摩爾/升范圍內有非常完美的線性關系。
Ø 檢測速度極快，完成一條標準曲線或5-10個樣品的測定只需3分鐘。
Ø 樣品范圍廣，可以檢測細胞或組織及其培養液中的一氧化氮的含量，酚紅和10%血清均對測定無明顯干擾，也可以檢測尿液中一氧化氮的含量。

包裝清單：
1M NaNO2 1ml
Griess Reagent I 25ml
Griess Reagent II 25ml
說明書 1份

保存條件：
4℃避光保存。本試劑盒在自訂購之日起4個月內有效。

注意事項：
Ø 本試劑盒所提供試劑均為有毒試劑，操作時請小心。
Ø 如保存不當導致溶液變色或沉淀，則說明該溶液已經失效，請購買新的試劑盒。
Ø 對于血清樣品中NO含量的測定，粗略地計算，可以直接用水稀釋標準品，從而計算出血清樣品中NO的濃度。 比較精確的計算。
如果測定的正常血清是常見血清可以從文獻上查到其中NO的濃度。然后用該已知NO濃度的血清稀釋標準品，這樣就可以得到比 較精確的NO濃度。或者使用已知濃度的人或其它動物的血清稀釋標準品也同樣可以達到目的。或者參照類似文獻進行血清中NO 濃度的測定。

簡要使用說明：
1. 按50微升/孔，在96孔板中加入標準品及樣品。
2. 按50微升/孔，在96孔板中加入標準品及樣品。
3. 按50微升/孔，在各孔中加入室溫Griess Reagent I。
4. 按50微升/孔，在各孔中加入室溫Griess Reagent II。
5. 540nm 測定吸光度。

詳細使用說明：
1. 取出Griess Reagent I和II，使回復室溫。
2. 用待測樣品所用溶液稀釋標準品（1-100微摩爾/升）。
例如樣品為細胞培養液上清，細胞培養液為 DMEM＋10%FBS，則用DMEM＋10%FBS稀釋標準品。通常標準品的濃度可取0, 1, 2, 5, 10, 20, 40, 60, 100微摩爾/升。
3. 按50微升/孔，在96孔板中加入標準品及樣品。
樣品為培養液上清，可以直接取樣，如果有可沉淀物則需離心后取上清。如樣品為細胞或組織，可以快速凍融裂解，然后離心沉淀取上清，體積不足50微升可以用重蒸水或 0.9%NaCl稀釋（相應地標準品也需用重蒸水或0.9%NaCl稀釋）。細胞或組織也
可以用于Western的RIPA裂解液（無需添加抑制劑）裂解，同樣標準品也需相應稀釋。
4. 按50微升/孔，在各孔中加入室溫Griess Reagent I。
5. 按50微升/孔，各孔中加入室溫Griess Reagent II。
6. 540nm 測定吸光度。
如無540nm 濾光片，520-560nm的濾光片也可。如無酶標儀或合適的濾光片，也可以通過目測比色，確定樣品中一氧化氮的濃度。目測比色時標準品需要更為精細的濃度梯度。

使用本產品的文獻：
Lu-yang YU, Bo LIN, Zhen-lin ZHANG, Li-he GUO. Direct transfer of A20 gene into pancreas protected mice from streptozotocin-induced diabetes1. Acta Pharmacol Sin 2004 Jun; 25 (6): 721-726.
注：本文由中國科學院上海生命科學院生化細胞所郭禮和教授實驗室發表，郭禮和教授為原中科院上海細胞生物學研究所所長；免費全文下載自：www.chinaphar.com/1671-4083/25/721.pdf

Yan-hua Zeng, Yi-mou Wu, Wen-bo Zhang, Min-jun Yu, Cui-ming Zhu and Li-zhi Tan. Activation of nuclear factor κB and induction of inducible nitric oxide synthase by lipid-associated membrane proteins isolated from
Mycoplasma penetrans. Chin Med J 2004;117(7):997-1001
注：Chin Med J即中華醫學雜志英文版，是歷史最悠久的中國醫學期刊。它源始于1887年3月在上海創刊的中國博醫會報（China Medical Missionary Journal），1907年改名為China Medical Journal。1932年該刊與中華醫學雜志（National Medical
Journal of China）的英文部分合并組成中華醫學雜志英文版（Chinese Medical Journal），直到今天。免費全文下載自：
http://www.cmj.org/information/full.asp?id=1673

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