產品簡介：

Ø 碧云天生產的超級感受態細菌制備試劑盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一種用于快速制備高轉化效率大腸桿菌

感受態細菌的試劑盒。超級感受態細菌制備試劑盒是在傳統超級感受態細菌制備方法的基礎上進行適當改良而成，操作便捷，轉
化效率高。
Ø 使用本試劑盒可以使感受態效率達到108-109 cfu/μg質粒。對于小的質粒效率略高，而對于大的質粒則效率略低一些。用本試
劑盒制備的超級感受態細菌不僅可以轉化質粒，而且非常適合于轉化普通的連接產物，特別適合于轉化平端連接等需要高轉化效
率的情況 。

Ø 使用本試劑盒操作簡單，細菌培養好后僅需60分鐘左右即可完成超級感受態細菌的制備。

Ø 本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。對于一些用于蛋白表達或病毒質粒構建
的特殊大腸桿菌也適用，制備出來的感受態菌轉化質粒肯定沒有問題，但如果轉化連接產物有時效果不如DH5α等其它常見的細
菌。
Ø 本試劑盒提供了專門用于制備超級感受態的特殊細菌培養液，可以提高制備出來的感受態菌的轉化效率，同時也方便了用戶，不

必自行配置相應的培養液。
Ø 本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進行100次轉化的感受態細菌。




包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
D0302-1 超級感受態細菌培養液 125 毫升
D0302-2 超級感受態制備試劑A 50 毫升
D0302-3 超級感受態制備試劑B 5 毫升
— 說明書 1 份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項：

Ø 在制備感受態細菌的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態菌的過程中熱休克后的37℃培養時也必須使用無抗生素的LB，
即便轉入的質粒是有抗性的。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用說明：

1. 涂平板：
為取得最佳的感受態效率，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板，并培養過夜。
2.
接種：


取一有新鮮培養的菌種的LB平板，后續操作均在超凈臺內進行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并在酒精燈上略略燒一下，

使鑷子的頂端處于無菌狀態。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽，從平板上挑取一個單克隆，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或
牙簽放到裝有3毫升LB的細菌培養試管內。上述操作也可以使用接種環等進行操作。
3. 培養：

37℃約200rpm培養過夜，通常培養時間控制在16小時左右為宜。絕對不宜超過18小時。
4. 再接種培養：

根據需要制備的超級感受態細菌的量，按照1:500的比例用新鮮培養的過夜菌接種培養。例如取100微升的新鮮過夜菌到50毫升本
試劑盒提供的超級感受態細菌培養液中，37℃約200rpm培養。通常在大約培養2.5-3.5小時后OD600可以達到0.6-0.7。
5. 制備感受態細菌：

(1) 在培養的細菌OD600達到0.6-0.7時，把培養的菌液置于冰浴中，冷卻15分鐘。注意：后續所有操作均須在4度或冰浴進行。
(2) 4℃ 4000g離心5分鐘收集細菌，棄上清。 注意：離心機必須預先冷卻。
(3) 如果離心沉淀前的菌量為50毫升，按后續操作進行，如果是其它體積則按比例換算后進行后續操作。
(4) 用20毫升預冷的超級感受態制備試劑A輕輕重懸細菌沉淀。懸浮時一定要很輕很慢，否則會影響效果。

(5) 冰浴15分鐘。
(6) 4℃ 4000g離心5分鐘收集細菌，棄上清。 注意：離心機必須預先冷卻。

(7) 用2毫升預冷的超級感受態制備試劑B輕輕重懸細菌沉淀。懸浮時一定要很輕很慢，否則會影響效果。
(8) 冰浴15分鐘。
(9) 在冰浴上進行分裝，可以根據需要適當分裝成50-200微升/管。
(10) 立即使用或用液氮或乙醇干冰浴速凍后-70℃保存。通常6個月內效率不會有明顯的變化。

6. 感受態細菌的使用：
(1) 對于感受態細菌效率的測定或連接產物的轉化(其它如基因突變產物的轉化等參考連接產物進行) ：
a) 在冰上緩慢融解感受態細菌(對于新鮮制備的感受態就可以直接使用了)，如果檢測感受態細菌的效率，加入10pg-1ng質
粒，但質粒的體積不宜超過感受態細菌量的10%。如果轉化連接產物，每50微升感受態細菌加入2-10微升連接產物。
b) 輕輕用手指彈動離心管，以混勻細菌和質粒或連接產物。冰浴或冰水浴放置30分鐘。
c) 42℃水浴，熱休克2分鐘。
d) 熱休克后立即置于冰水浴中，2分鐘。
e) 加入900微升LB，37℃200rpm培養1小時。
f) 如果檢測感受態效率，取100微升涂布到含有相應抗生素的LB平板上。如果轉化的是連接產物，2000-3000g離心1分鐘或更
長時間使細菌充分沉淀下來。去除約900-950微升LB培養液。細菌沉淀用余下的LB培養液重懸，然后全部涂布到含有適當抗
生素的LB平板上。37℃培養過夜。
(2) 對于質粒的轉化：
a) 融解感受態細菌，加入不少于50ng質粒到30-50微升感受態細菌中。質粒的量可以是1微克或更多，但體積不宜超過感受態
細菌量的10%。
b) 輕輕用手指彈動離心管，以混勻細菌和質粒。冰浴或冰水浴放置10分鐘。
c) 取全部菌液直接涂布到含有適當抗生素的LB平板上，37℃培養過夜。