產(chǎn)品簡介：

Ø Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

Ø WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參

考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1. WST-8檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑 )

Ø WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫

酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以
省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更穩(wěn)定，
使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
Ø WST-8和WST-1相比，檢測(cè)靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。

Ø 本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè)，也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)，或一些藥物誘

導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測(cè)。
Ø 本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進(jìn)行任何配制等操作。無須使用同位素，所

有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批
量樣品的檢測(cè)。
Ø 酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無明顯影響。

Ø WST-8對(duì)細(xì)胞無明顯毒性。加入WST-8顯色后可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測(cè)時(shí)間更加靈活，便于找到最佳測(cè)定時(shí)間。

Ø 關(guān)于不同細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的比較和選擇，請(qǐng)參考 http://www.beyotime.com/mtt-comp.htm 。

Ø 本試劑盒可以測(cè)定500個(gè)樣品。


包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
C0038 CCK-8溶液 5 ml
— 說明書 1 份




保存條件：

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。




注意事項(xiàng)：

Ø 由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采

取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

Ø 本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。

Ø 用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。

Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1. 通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，
需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推。可以用加了相

應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培

養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情

況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 在450nm測(cè)定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波

長進(jìn)行雙波長測(cè)定。



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