產品簡介：
 免疫熒光染色試劑盒(Immunol Fluorence Staining Kit)系列是碧云天開發的用于細胞或組織切片免疫熒光染色的試劑盒。在有適當的一抗檢測特定的目標蛋白時，就可以使用免疫熒光染色試劑盒檢測到紅色、綠色或藍色熒光。
 免疫熒光染色試劑盒－抗小鼠Cy3 (Immunol Fluorence Staining Kit with Cy3-Labeled Goat Anti-Mouse IgG)，含有Cy3標記的山羊抗小鼠IgG (H+L)抗體，可以用于檢測小鼠來源的相應一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的紅色。
 Cy3是近年新開發的一種紅色熒光探針。它比絕大部分其它的紅色熒光探針更加明亮，更加不容易淬滅，而且背景更低。Cy3的發射和吸收峰參見下表。
Fluorophore Absorption Peak (nm) Emission Peak (nm)
Cy3 550 570
 本試劑盒提供了含有熒光標記抗體穩定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標記抗體稀釋后在4℃可以保存長達6個月，并且在6個月內至少可以重復使用10次。
 本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。
 本試劑盒對于六孔板內的細胞樣品或常規切片，至少可以檢測300個樣品。
包裝清單：
產品編號 產品名稱 包裝
P0193-1 抗小鼠Cy3 0.03ml
P0193-2 免疫熒光染色二抗稀釋液 50ml
P0193-3 抗熒光淬滅封片液 15ml
— 說明書 1份
保存條件：
-20℃保存，一年有效。同時抗小鼠Cy3需避光保存。
注意事項：
 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時間。
 熒光物質均易發生淬滅，染色后宜盡快進行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時觀察可以4℃避光保存，但存放時間通常不宜超過一周，隨著存放時間的延長可能會導致觀察效果越來越差。
 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關系非常密切。建議選購有較多文獻報道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實驗。
 如果觀察時發現熒光過弱，可以適當提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當提高熒光標記抗體的濃度。
 需自行配制用于免疫熒光染色的相關試劑，需自備蓋玻片和載玻片(可以向碧云天訂購)。
 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 免疫熒光染色的準備工作：
A. 固定液的準備：
推薦使用碧云天生產的免疫染色固定液(P0098)，也可以用4%多聚甲醛作為固定液，或根據特定的一抗或樣品采用有效成分為乙醇、甲醇或其它類型的固定液。
B. 洗滌液的準備：
推薦使用碧云天生產的免疫染色洗滌液(P0106)，也可以按照如下方法配制TBSTx作為洗滌液：
10XTBS的配制：稱取24.2g Tris (Tris堿), 80g NaCl；用鹽酸調節pH值至7.6，定容至一升。
TBS配制：把10XTBS按照1:9的比例用水稀釋至1X即為TBS。
TBSTx的配制：在TBS中加入Triton X-100使最終濃度為0.1％ ，混勻，即為TBSTx。
C. 封閉液的準備：
推薦使用碧云天生產的免疫染色封閉液(P0102)，也可以按照如下方法配制含5%BSA的TBSTx作為封閉液：
含5%BSA的TBSTx的配制：在100毫升TBSTx中加入5克BSA，溶解并混勻，即為含5%BSA的TBSTx。
D. 一抗稀釋液的準備：
推薦使用碧云天生產的免疫染色一抗稀釋液(P0103)，也可以使用上述封閉液，即含5%BSA的TBSTx，作為一抗稀釋液。
E. 一抗的稀釋：
按照一抗說明書中推薦的用于免疫熒光染色的稀釋比例用一抗稀釋液稀釋一抗。
F. 熒光標記二抗的稀釋：
把熒光標記的二抗，按照1:1000的比例用本試劑盒提供的免疫熒光染色二抗稀釋液進行稀釋。根據熒光的強弱，稀釋的比例可以適當提高或降低。
2. 對于貼壁細胞：
A. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。
B. 按照特定的實驗目的處理細胞后，吸盡培養液，加入1ml固定液，固定10分鐘或更長時間(可4℃固定過夜)。
C. 去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。
D. 用封閉液封閉60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。
E. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。為增強與一抗的結合，可以4℃作用過夜。
F. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動。
G. 去除洗滌液，加入1毫升稀釋好的熒光標記的二抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。
H. 回收熒光標記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動。
I. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。
J. 如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到紅色的熒光。
3. 對于懸浮細胞：
A. 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內，吸除上清后輕輕彈散細胞。
B. 加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。
C. 離心去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘。洗滌期間可以用手或搖床輕輕晃動。
D. 最后一次離心后吸去大部分液體保留約50微升液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。
E. 稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。條件許可的，可以使用適當的離心機，通過離心把細胞貼緊在載玻片上。
F. 用封閉液封閉60分鐘。封閉及后續的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或郵寄夾進行操作。
G. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘。為增強與一抗的結合，可以4℃作用過夜。
H. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
I. 去除洗滌液，加入稀釋的熒光標記的二抗作用60分鐘。
J. 回收熒光標記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
K. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。
L. 如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到紅色的熒光。
4. 對于組織切片：
A. 對于石蠟切片，需先完成脫蠟、水化和抗原修復。對于冰凍切片可以直接按照下面的步驟操作。
B. 用固定液固定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。固定及后續的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或郵寄夾進行操作。
C. 去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。
D. 用封閉液封閉60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。
E. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。為增強與一抗的結合，可以4℃作用過夜。
F. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動。
G. 去除洗滌液，加入1毫升稀釋好的熒光標記的二抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動。
H. 回收熒光標記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時都可以在搖床上輕輕搖動。
I. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。
J. 如果一抗選用適當，在熒光顯微鏡下可以觀察到紅色的熒光。