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支原體染色檢測試劑盒




產品編號 產品名稱 包裝 價格
C0296 支原體染色檢測試劑盒 >100次 196.00元







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產品簡介：

Ø 支原體染色檢測試劑盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是用于在培養細胞中原位染色檢測支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測培養細胞中是否存在支原體污染。
Ø 培養細胞中的細菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學顯微鏡下可見，但支原體污染在光學顯微鏡下不可見，必須通過特定的檢測方法進行檢測。
Ø 檢測支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養、支原體特異酶檢測、RT-PCR檢測以及DNA熒光染色檢測。上述檢測方法中，除DNA熒光染色檢測外操作步驟相對比較煩瑣并且所需時間較長。本支原體染色檢測試劑盒是通過Hoechst染色來檢測支原體的。本試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染。


Ø 本試劑盒的檢測效果圖參考上圖。左圖為無支原體污染情況，中圖為支原體輕度污染情況，箭頭所指為微粒狀的一些支原體，右圖為支原體重度污染情況，可見大量微粒狀的支原體。
Ø 如果發現有支原體污染，建議更換無污染的細胞進行培養。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。
Ø 本試劑盒如用于六孔板樣品檢測，至少可以檢測100個樣品。





包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
C0296-1 固定液 100ml
C0296-2 Hoechst染色液 10ml
C0296-3 抗熒光淬滅封片液 10ml
— 說明書 1份





保存條件：

4℃保存，一年有效，其中Hoechst染色液需避光保存。



注意事項：

Ø Hoechst染色試劑對人體有害，請注意適當防護。
Ø 固定液含有乙酸，有刺激性氣味，宜在通風櫥內進行固定操作。
Ø 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。
Ø 檢測支原體前最好用不含抗生素的培養液培養2-3代，這樣更容易檢測出支原體，因為一些抗生素可以抑制支原體生長。
Ø 需自備PBS。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. 細胞樣品的準備：
a. 對于貼壁細胞，在六孔板或其它多孔板內或蓋玻片上培養細胞至50%-80%滿。
細胞培養過滿會導致很難判斷是否存在支原體污染。
b. 對于懸浮細胞，離心沉淀細胞，取少量細胞做細胞涂片，空氣中充分晾干。
2. 用PBS按照1:10稀釋Hoechst染色液(1體積Hoechst染色液加入9體積PBS)。
稀釋后的Hoechst染色液宜在24小時內使用。
3. 加適量固定液固定10-20分鐘。
對于六孔板的一個孔，加入1ml固定液。確保固定液充分覆蓋樣品，固定前切勿對細胞進行洗滌。另外對于貼壁細胞，固定前需去除培養液。
4. 去除固定液，空氣中晾干。
5. 加適量10倍稀釋的Hoechst染色液室溫染色10-30分鐘。
對于六孔板的一個孔，加入1ml染色液。確保染色液充分覆蓋樣品，染色時注意避光。可以用鋁箔紙避光。
6. 去除染色液，空氣中晾干。
7. 滴加試劑盒中提供的抗熒光淬滅封片液，封片后熒光顯微鏡下觀察藍色熒光。
熒光顯微鏡觀察時需400倍或1000倍放大觀察(需使用油鏡)。參考上圖判斷支原體污染情況。沒有支原體污染或其它原核生物污染的細胞樣品，僅觀察到細胞核的藍色熒光，線粒體DNA不會被染色。有支原體污染的細胞樣品可以觀察到細胞核周圍微粒狀或絲狀藍色熒光。支原體污染嚴重的細胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍色熒光。有細菌、酵母或霉菌污染的情況雖然Hoechst染色也會呈陽性，但細菌、酵母或霉菌污染在光學顯微鏡下可以觀察到，而支原體觀察不到，由此可以初步區分是支原體還是其它微生物。如有必要進一步鑒定，可以通過把支原體接種培養和RT-PCR等方法進行進一步檢測。