產品簡介：

Ø 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。
Ø 絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂，并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大，表達pH6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。
Ø 碧云天生產的細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。參考圖1。


圖1. 正常細胞和衰老細胞用細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒染色后的示例圖片。

Ø 本試劑盒僅染色衰老細胞，不會染色衰老前的細胞(presenescent cells)、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞
(immortal cells)或腫瘤細胞。
Ø 如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定。對于普通的切片也至少足夠檢測100個樣品。







包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
C0602-1 β-半乳糖苷酶染色固定液 100ml
C0602-2 X-Gal溶液 5ml
C0602-3 β-半乳糖苷酶染色液A 1ml
C0602-4 β-半乳糖苷酶染色液B 1ml
C0602-5 β-半乳糖苷酶染色液C 100ml
— 說明書 1份





保存條件：

-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。



注意事項：

Ø β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意防護。

Ø β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正常現象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解。作為常規，試劑使
用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
Ø 需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. 對于貼壁細胞：
a. 對于6孔板中培養的細胞，吸除細胞培養液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分
鐘。對于其它類型的培養板，固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。
b. 吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。
c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器
配制染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。
β-半乳糖苷酶染色液A 10微升
β-半乳糖苷酶染色液B 10微升
β-半乳糖苷酶染色液C 930微升
X-Gal溶液 50微升

說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌；而聚苯乙烯容器不適合高溫高

壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。

d. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發。

e. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天；或者加上封片液
封片后，4℃可以保存較長時間。
2. 對于懸浮細胞：
a. 離心收集細胞至1.5ml離心管內，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時可
以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。

b. 離心，吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。

c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜。

e. 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工
作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數天。如果離心，取細胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。

3. 對于組織切片：
a. 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。
b. 加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。
c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。
d. 吸除PBS，加入適當量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
e. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發。最好把整個切片浸泡在染色工作液中。
f. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。