產(chǎn)品簡介：

Ø Lipofecter脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑(Lipofecter Liposomal Transfection Reagent)是一種適合于把質(zhì)粒或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸，以及核酸蛋白復(fù)合物或帶負(fù)電荷的蛋白轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的真核細(xì)胞中的高效轉(zhuǎn)染試劑。Lipofecter還可以進(jìn)行活體動物的細(xì)胞轉(zhuǎn)染，用于基因治療等。
Ø 為了實(shí)現(xiàn)在真核細(xì)胞中高效轉(zhuǎn)染的目的，磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體、陽離子聚合物、病毒、顯微注射、電轉(zhuǎn)等許多方法被發(fā)展起來。但這些方法存在一個(gè)或多個(gè)缺點(diǎn)，包括有細(xì)胞毒性、重復(fù)性差、操作煩瑣、轉(zhuǎn)染效率相對較低或價(jià)格非常昂貴等。
Ø 碧云天獨(dú)立研發(fā)的Lipofecter脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，盡量避免了上述缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了無明顯細(xì)胞毒性、重復(fù)性好、操作簡單、轉(zhuǎn)染效率較高，并且價(jià)格非常優(yōu)惠。
Ø Lipofecter轉(zhuǎn)染試劑是一種經(jīng)過精心優(yōu)化配制的陽離子脂質(zhì)體，Lipofecter不僅適用于常規(guī)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，也適用于siRNA轉(zhuǎn)染。
Ø 和其它一些陽離子脂質(zhì)體不同的是，使用Lipofecter轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率，這樣可以減小去除血清對細(xì)胞的損傷。
Ø Lipofecter對于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞均適用，并且可以用于穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。
Ø Lipofecter的轉(zhuǎn)染效率可以通過轉(zhuǎn)染表達(dá)EGFP或其它熒光蛋白的質(zhì)粒進(jìn)行快速鑒定。
Ø 關(guān)于碧云天生產(chǎn)的不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的主要特點(diǎn)和比較，以及如何選細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可參考我們的相關(guān)網(wǎng)頁：
http://www.beyotime.com/cell-transfection.htm 。
Ø 對于六孔板而言，一個(gè)包裝的本轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染250個(gè)孔。



包裝清單：

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0517 Lipofecter脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 1ml
— 說明書 1份





保存條件：

4℃保存，一年有效。



注意事項(xiàng)：

Ø 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。對于質(zhì)粒，可以使用碧云天生產(chǎn)的質(zhì)粒大量抽提試劑盒進(jìn)行抽提，以保證可以獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
Ø 轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)。
Ø 需自備不含抗生素和glutamine的DMEM溶液。
Ø Lipofecter不能vortex或離心，宜緩慢晃動混勻。
Ø Lipofecter使用后請立即蓋好蓋子，避免長時(shí)間暴露在空氣中，影響轉(zhuǎn)染效率。

Ø 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. 細(xì)胞培養(yǎng)(以六孔板為例，其它培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿參考六孔板進(jìn)行操作)：
在轉(zhuǎn)染前一天(20-24小時(shí))把約20-60萬細(xì)胞(具體的細(xì)胞數(shù)量據(jù)細(xì)胞大小和細(xì)胞生長速度而定)培養(yǎng)到六孔板內(nèi)，使第二天細(xì)胞能達(dá)到約70-80%滿。
2. 在進(jìn)行下述轉(zhuǎn)染步驟前，把六孔板每孔內(nèi)換成新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液。
3. 把Lipofecter脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻。
4. 參考下表，對于待轉(zhuǎn)染的六孔板中一個(gè)孔的細(xì)胞，依次加入4微升Lipofecter，適量不含抗生素和glutamine的DMEM溶液，及1.5微克DNA，使最終體積為70微升，用槍輕輕吹打混勻。注意：不可Vortex或離心。

One well for 6-well plate
One well for 12-well plate
One well for 24-well plate
60mm dish

Lipofecter
4微升
2微升
1微升
8微升

DMEM
(66-x)微升
(33-x)微升
(17-x)微升
(132-x)微升

DNA
x微升(1.5微克)
x微升(0.8微克)
x微升(0.4微克)
x微升(3微克)

Final volume
70微升
35微升
18微升
140微升


注1：對于六孔板中一個(gè)孔的細(xì)胞，Lipofecter的用量可以在2-6微升內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，DNA用量可以在1-3微克的范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。最佳的轉(zhuǎn)染條件，因具體的細(xì)胞和培養(yǎng)條件而定，可以在上述推薦范圍內(nèi)自行優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
注2：對于其它培養(yǎng)板或培養(yǎng)器皿，各種試劑的用量可以按照細(xì)胞培養(yǎng)面積按比例進(jìn)行換算。如果轉(zhuǎn)染RNA或寡核苷酸等可以參考轉(zhuǎn)染DNA的條件進(jìn)行。
注3：轉(zhuǎn)染siRNA或其它類似的數(shù)十個(gè)堿基對雙鏈核酸可以參考下表進(jìn)行：
For siRNA
One well for 6-well plate

DMEM
(67-x)微升

Lipofecter
3微升

DNA
x微升(1微克)

Final volume
70微升


5. 15-25℃孵育15分鐘。有可能出現(xiàn)絮狀沉淀物，屬正常現(xiàn)象，不會影響轉(zhuǎn)染效率。
6. 無論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，均把70微升Lipofecter-DNA混合物全部加入六孔板的一個(gè)孔內(nèi)。加入時(shí)注意盡量均勻加入到整個(gè)孔內(nèi)，隨后輕輕混勻。
7. 細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5-6小時(shí)后，吸除含有Lipofecter-DNA的培養(yǎng)液。每孔加入2ml新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
注：轉(zhuǎn)染后5-6小時(shí)不更換細(xì)胞培養(yǎng)液對大多數(shù)細(xì)胞無明顯毒性，更換培養(yǎng)液對一些細(xì)胞可以提高轉(zhuǎn)染效率。
8. 對于基因表達(dá)，再培養(yǎng)24-40小時(shí)后即可檢測轉(zhuǎn)染效果；對于RNAi通常需要培養(yǎng)3-5天，并且期間需要更換培養(yǎng)液。如果用于篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染后24-40小時(shí)即可加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物，例如G418等，進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。