產品簡介：

Ø Lipotap脂質體轉染試劑(Lipotap Liposomal Transfection Reagent)是一種適合于把質粒或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸，以及核酸蛋白復合物或帶負電荷的蛋白轉染到培養的真核細胞中的高效陽離子脂質體轉染試劑。Lipotap還可以進行活體動物的細胞轉染，用于基因治療等。
Ø 為了實現在真核細胞中高效轉染的目的，磷酸鈣沉淀法、脂質體、陽離子聚合物、病毒、顯微注射、電轉等許多方法被發展起來。但這些方法存在一個或多個缺點，包括有細胞毒性、重復性差、操作煩瑣、轉染效率相對較低或價格非常昂貴等。
Ø 碧云天獨立研發的Lipotap脂質體轉染試劑，盡量避免了上述缺點，實現了無明顯細胞毒性、重復性好、操作簡單、轉染效率較高，并且價格非常優惠。用Lipotap轉染細胞后，對于大多數細胞，72小時內不更換培養液無明顯細胞毒性。
Ø Lipotap轉染試劑是一種經過精心優化配制的陽離子脂質體。Lipotap不僅適用于常規的質粒轉染，也適用于siRNA轉染。
Ø 和其它一些陽離子脂質體不同的是，使用Lipotap轉染時血清的存在不影響轉染效率，這樣可以減小去除血清對細胞的損傷。
Ø Lipotap對于貼壁細胞和懸浮細胞均適用，并且可以用于穩定表達細胞株的篩選。
Ø Lipotap的轉染效率可以通過轉染表達EGFP或其它熒光蛋白的質粒進行快速鑒定。
Ø 關于碧云天生產的不同細胞轉染試劑的主要特點和比較，以及如何選細胞轉染試劑可參考我們的相關網頁：
http://www.beyotime.com/cell-transfection.htm 。
Ø 對于六孔板而言，一個包裝的本轉染試劑可以轉染40個孔。




包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
C0520 Lipotap脂質體轉染試劑 0.6ml
— 說明書 1份





保存條件：

4℃保存，一年有效。



注意事項：

Ø 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率。對于質粒，可以使用碧云天生產的質粒大量抽提試劑盒進行抽提，以保證可以獲得較高的轉染效率。
Ø 轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。
Ø 需自備不含抗生素和glutamine的DMEM溶液。
Ø Lipofecter不能vortex或離心，宜緩慢晃動混勻。
Ø Lipofecter使用后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露在空氣中，影響轉染效率。

Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. 細胞培養(以六孔板為例，其它培養板或培養皿參考六孔板進行操作)：
在轉染前一天(20-24小時)把約20-60萬細胞(具體的細胞數量據細胞大小和細胞生長速度而定)培養到六孔板內，使第二天細胞能達到約70-80%滿。
2. 在進行下述轉染步驟前，把六孔板每孔內換成新鮮的細胞培養液。
3. 把Lipotap脂質體轉染試劑輕輕混勻。
4. 參考下表，對于待轉染的六孔板中一個孔的細胞，依次加入適量不含抗生素和glutamine的DMEM溶液，15微升Lipotap，及2.5微克DNA，使最終體積為75微升，用槍輕輕吹打混勻。注意：不可Vortex或離心。

One well for 6-well plate
One well for 24-well plate
60mm dish
100mm dish

DMEM
(60-x)微升
(15-x)微升
(120-x)微升
(240-x)微升

Lipotap
15微升
4微升
30微升
60微升

DNA
x微升(2.5微克)
x微升(0.6微克)
x微升(5微克)
x微升(10微克)

Final volume
75微升
19微升
150微升
300微升


注1：對于六孔板中一個孔的細胞，Lipotap的用量可以在8-20微升內進行適當調節，DNA用量可以在1-4微克的范圍內進行適當調節。最佳的轉染條件，因具體的細胞和培養條件而定，可以在上述推薦范圍內自行優化轉染條件。
注2：對于其它培養板或培養器皿，各種試劑的用量可以參考上表按照細胞培養面積按比例進行換算。如果轉染RNA或寡核苷酸等可以參考轉染DNA的條件進行。
注3：轉染siRNA或其它類似的數十個堿基對雙鏈核酸可以參考下表進行：
For siRNA
One well for 6-well plate

DMEM
(65-x)微升

Lipofecter
10微升

DNA
x微升(1.6微克)

Final volume
75微升


5. 15-25℃孵育15分鐘。有可能出現絮狀沉淀物，屬正常現象，不會影響轉染效率。
6. 無論是貼壁細胞還是懸浮細胞，均把75微升Lipotap-DNA混合物全部加入六孔板的一個孔內。加入時注意盡量均勻加入到整個孔內，隨后輕輕混勻。
7. 細胞培養箱內培養3-6小時后，去除含有Lipotap-DNA的培養液。每孔加入2ml新鮮細胞培養液繼續培養。
注：通常Lipotap-DNA混合物和細胞一起孵育3-10小時已經足夠產生較高的轉染效率。大多數細胞和Lipotap-DNA一起培養長達72小時未見明顯細胞毒性。但轉染后3-6小時更換新鮮培養液對于一些生長非常快速的細胞有助于提高轉染效率。
8. 對于基因表達，再培養24-40小時后即可檢測轉染效果；對于RNAi通常需要培養3-5天，并且期間需要更換培養液。如果用于篩選穩定表達細胞株，則在轉染后24-40小時即可加入適當的篩選藥物，例如G418等，進行穩定表達細胞株的篩選。