產品簡介：

Ø 生物素隨機引物DNA標記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機引物標記反應產生生物素標記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標記的生物素DNA探針可以用于常規的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。
Ø 在Klenow酶(Klenow fragment,3’-5’exo-)催化下，通過隨機引物標記反應(random prime labeling)可以把生物素標記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產生生物素標記的DNA探針。在隨機引物標記反應過程中，一些標記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機引物標記反應，最后可以產生比模板DNA量更多的生物素標記DNA探針，可多達1-15倍左右。
Ø 本試劑盒可以用于多種DNA模板的標記，包括DNA片斷、線性化的質粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片斷應不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用碧云天生產的生物素3''末端DNA標記試劑盒(D3106)進行DNA探針標記。
Ø 用于本試劑盒的模板DNA的量應不少于10ng，推薦的模板用量為100ng-1微克。
Ø 本試劑盒中提供了已經用生物素標記好的Biotin-Control DNA，可以用作檢測生物素DNA探針標記效率的對照。
Ø 生物素標記DNA可以使用碧云天生產的化學發光法生物素標記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當試劑盒進行檢測。
Ø 本試劑盒可以用于10個標記反應。


包裝清單：

產品編號
產品名稱
包裝

D3118-1
Random Primer in Buffer(5X)
105微升

D3118-2
Klenow Fragment
11微升

D3118-3
Biotin-Labeling Mix
50微升

D3118-4
Ultrapure Water
1毫升

D3118-5
Biotin-Control DNA(3ng/微升)
50微升

D3118-6
探針標記終止液
100微升

—
說明書
1份





保存條件：

-20℃保存。



注意事項：

Ø 需自備用于探針標記效率檢測的相關試劑。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用說明：

1. 在一離心管或PCR管內加入100ng-1微克DNA模板，再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water，至總體積為34微升。
說明：通常100-300ng DNA模板已經足夠用于一次標記反應。
2. 加入10微升Random Primer in Buffer(5X)，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設置100℃，99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預先準備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5微升Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1微升Klenow Fragment，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時或過夜(不宜超過20小時)。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標記DNA的產量，因此推薦孵育過夜(12-20)小時。
8. 加入3微升探針標記終止液，混勻，終止標記反應。至此標記反應已經全部完成，標記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時探針可以直接用于探針標記效率的檢測及Southern、Northern等后續操作。
10. 整個探針標記反應的流程參見下表：
100ng-1微克DNA模板
x微升

Ultrapure Water
(34-x)微升

Random Primer in Buffer(5X)
10微升

100℃ 5分鐘，立即冰浴冷卻

Biotin-Labeling Mix
5微升

Klenow Fragment
1微升

總體積
50微升

37℃孵育過夜

探針標記終止液
3微升

-20℃保存

此時可用于標記效率的檢測及Southern、Northern等后續檢測


11. 探針標記效率的檢測：可以對標記好的探針進行適當梯度稀釋后，使用碧云天生產的化學發光法生物素標記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當的方法進行檢測。通常探針的標記效率可以參考下表：
模板DNA量
生物素標記DNA產量

－
孵育1小時
孵育20小時

10ng
80ng
900ng

30ng
150ng
1350ng

100ng
350ng
1650ng

300ng
750ng
2200ng

1000ng
1300ng
2600ng

3000ng
1600ng
2600ng


注意：具體的探針標記效率還和模板DNA的長度、純度等因素有關，上表的數值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標記DNA的長度通常在數百bp左右。具體的長度因模板的長度而有所不同。例如模板DNA的長度為1kb，則生物素標記DNA產物的長度通常為100-1000bp，平均長度約為300bp左右。