產品簡介：

Ø BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)(Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實現了蛋白濃度測定的簡單，高穩定性，高靈敏度和高兼容性。
Ø 和碧云天生產的普通BCA蛋白濃度測定試劑盒相比，靈敏度更高，檢測濃度下限達到10微克/毫升，最小檢測蛋白量達到0.2微克，待測樣品體積為1-20微升。
Ø 和碧云天生產的普通BCA蛋白濃度測定試劑盒相比，顯色速度更快，相同的樣品孵育較短時間即可進行吸光度測定。
Ø 在20-1000微克/毫升濃度范圍內有較好的線性關系。
Ø BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。不適用BCA法時建議試用碧云天生產的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)對樣品中各種物質的詳細的兼容性和普通的BCA蛋白濃度測定試劑盒相同，請參考碧云天如下網頁:
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
Ø 每個試劑盒可以檢測5000個樣品。



包裝清單：

產品編號
產品名稱
包裝

P0009-1
BCA試劑 A
500ml/瓶，共2瓶

P0009-2
BCA試劑 B
30ml

P0009-3
蛋白標準(BSA)
30mg/管，共2管

P0009-4
蛋白標準配制液
5ml

—
說明書
1份





保存條件：

室溫保存。蛋白標準配制成溶液后-20℃凍存。


注意事項：

Ø 需酶標儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據比色皿的最小檢測體積，適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
Ø 如發現樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用碧云天生產的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø 為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當用微波爐加熱，但是切勿過熱。
Ø EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用碧云天生產的Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006)。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1. 取1.2ml蛋白標準配制液加入到一管蛋白標準(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標準溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。
2. 取適量25mg/ml蛋白標準，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取20微升 25mg/ml蛋白標準，加入980微升稀釋液即可配制成0.5mg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準也可以-20℃長期保存。
3. 根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml BCA試劑A加100微升BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內穩定。
4. 將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微升。
5. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標準品稀釋液到20微升。
6. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置20-30分鐘。
注: 也可以室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當延長孵育時間。
7. 測定A562，540-595nm之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出蛋白濃度。

常見問題：
1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質，詳細的BCA法的兼容性列表請參考碧云天如下網頁:
http://www.beyotime.com/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？
建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

使用本產品的文獻：
1. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue，

β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis.
Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.
注：本研究論文由清華大學發表，該雜志2003年的影響因子為4.995 (Impact factor: 4.995)。

2. 劉軍 丁勁 薛采芳 李英輝 宮衛東 趙亞 黃豫曉 帶有蛋白轉導域的靶向核糖核酸酶對乙型肝炎病毒復制的影響。中華肝臟病雜志2004年第6期第377頁

3. Zhong-shu Liang , Kan Yang and Ben-mei Chen.

Cholesterol in U937 foam cells assayed in liquid chromatographic-mass spectrometry.
Chin J Mod Med; 2004, 14(20): 51-56.

4. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY.
Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells.
Toxicol Appl Pharmacol. 2004 Jan 15;194(2):141-55. (Impact factor: 2.851)

5. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ.
A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres.
Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7. (Impact factor:2.836)

6. Liu MJ, Yue PY, Wang Z, Wong RN.
Methyl protodioscin induces G2/M arrest and apoptosis in K562 cells with the hyperpolarization of mitochondria.

Cancer Lett. 2005, 224:229–241. (Impact factor: 2.614)


7. Liu MJ, Wang Z, Ju Y, Wong RN, Wu QY.
Diosgenin induces cell cycle arrest and apoptosis in human leukemia K562 cells with the disruption of Ca2+ homeostasis.
Cancer Chemother Pharmacol. 2005 Jan;55(1):79-90.(Impact factor: 2.046)

8. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu.
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
World Chin J Digestol. 2005 april 15;13(8):958-962.

9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang.
Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine.
Toxicology Letters 159 (2005) 71–82. (Impact factor: 2.571)

10. Jin Ding, Jun Liu, Cai-Fang Xue, Ying-Hui Li, Ya Zhao, Jun Chen, Yu-Xiao Huang, Zhong-Xiang Liu
TatPTD can introduce HBV targeted ribonuclease into hepatocytes.
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2005;13(8):958-962