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康成生物為您提供一站式ChIP-qPCR技術服務，您只需要提供保存完好的組織或細胞標本，康成的技術服務人員就可為您完成全部實驗操作，并提供完整的實驗報告。
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ChIP-qPCR技術服務
康成生物提供ChIP-qPCR服務，能夠檢測特定轉錄因子/組蛋白修飾與已知基因啟動子區域的結合；在已知啟動子范圍內尋找特定轉錄因子/組蛋白修飾的結合位點。
ChIP-qPCR完美結合了ChIP技術和實時定量PCR技術。ChIP技術利用抗體特異性富集與特定轉錄因子/組蛋白修飾結合的DNA片段；qPCR技術使用SYBR熒光染料，非特異性的摻入DNA雙鏈，發射熒光，保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步，最后利用Ct值進行定量分析。ChIP-qPCR能夠專一，靈敏，快速，高重復地定量生物樣品中特定轉錄因子/組蛋白修飾與已知基因啟動子的結合。
ChIP-qPCR技術特點：
· 高特異性，針對感興趣的基因啟動子設計特異性的實時熒光定量PCR引物；
· 超寬的線性范圍，可跨越7個數量級；
· 精確度高，重復性好；
· 靈敏度高
康成生物ChIP-qPCR技術服務流程：
A. 樣品交聯，甲醛處理細胞，交聯DNA與DNA結合蛋白
B. 超聲打斷染色質，裂解細胞，并以超聲波將染色質打斷成400-500bp的片段
C. 染色質免疫共沉淀，將B所得片段分成兩份，一份與特異性抗體進行免疫共沉淀(ChIP)，另一份作為Total input樣品
D. DNA純化，將C所得兩份蛋白-DNA復合物解交聯，純化分離DNA片段。ChIP富集的DNA片段(ChIP DNA)，Total input樣品中的DNA片段(Total input DNA)
E. 實時熒光定量PCR檢測
實驗數據處理
● Total input DNA樣品作為模板，用待測基因特異性引物進行qPCR，檢測得到Ct值(Input)
● ChIP DNA樣品作為模板，用待測基因特異性引物進行qPCR，檢測得到Ct值(ChIP)
● 待測基因免疫共沉淀的效率(ChIP / Total input)可通過以下公式計算：
%(ChIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (ChIP) ] * 100
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