circRNA是目前生命科學領域新興的研究熱點分子之一。區別于傳統的線性RNA，circRNA具有獨特的閉合環狀結構，使得其對核酸酶不敏感，所以比線性RNA更為穩定，非常適合作為臨床診斷標志物（biomarker）。近期研究表明，circRNA主要通過吸附miRNA抑制后者對相應靶基因的調控，稱之為競爭性內源RNA（ceRNA），而與疾病相關聯miRNA的相互作用說明circRNA對疾病的調控起著非常重要的功能。
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康成生物為您提供一站式的circRNA實時定量PCR技術服務，您只需要提供保存完好的組織或細胞樣本，本公司專業技術服務人員就可為您完成circRNA實時定量PCR實驗操作和數據分析，提供您完整的實驗報告，為你節省大量的時間和精力。
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circRNA實時定量PCR技術服務流程
1. 獨特的引物設計
由于circRNA獨特的閉合環狀結構，在進行實時定量PCR檢測的時候需要更為特異的引物設計；針對circRNA特異的back splicing site，引物設計在該位點兩側（如下圖），即“外向引物”（區別于線性RNA的內向引物）。
2. 樣品RNA抽提
a.組織樣本：取適量（50-100mg）新鮮組織或正確保存的組織樣本，勻漿后用Trizol試劑抽提RNA。
b.細胞樣本：取1×106-1×107細胞，PBS清洗細胞，吸去PBS后用Trizol試劑抽提RNA。
3. RNA質量檢測
a.紫外線吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度及并通過 A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的純度；
b.甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性。
4. 逆轉錄合成cDNA
利用random primer進行RT反應，合成cDNA。
5. 實時定量PCR
以合成的cDNA作為模版進行實時定量PCR擴增；同時檢測每個樣本中內參基因的表達量，校正上樣誤差。
6. 分析結果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結果，提供實驗報告，包括詳細的實驗方法、實時定量PCR實驗數據和圖表。
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上海康成生物工程有限公司自2002年起專注于生物科研技術服務，是國內最早一批專業提供生命科學前沿研究技術服務的高科技企業。為進一步拓展在醫學科研服務領域業務的深度和廣度，向多譜領域發展，重塑品牌 Aksomics（數譜生物）。Aksomics全面整合公司在非編碼RNA（lncRNA、circRNA、small RNA等）、表觀遺傳學、蛋白組學等檢測方向的核心技術，依靠自身優秀的研發、技術、營銷和服務團隊，憑借國際領先的技術平臺和高標準的質控體系，形成了涵蓋表觀基因組學、轉錄組學、蛋白質組學及代謝組學等各個研究領域的一站式技術平臺。
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