DNA甲基化——HRM檢測服務(wù)

    DNA甲基化是發(fā)生在DNA堿基序列上的一種共價(jià)修飾。在哺乳動(dòng)物中，DNA甲基化主要發(fā)生在5-CpG-3雙核苷酸序列的胞嘧啶上。在人類基因組中，大約有60～70的CpG胞嘧啶是甲基化的，其程度因不同的物種和細(xì)胞類型而異。DNA甲基化狀態(tài)在基因組中呈現(xiàn)出一定的分布模式，90％的甲基胞嘧啶位于重復(fù)序列上。DNA甲基化可以遺傳，并改變了DNA的結(jié)構(gòu)特性與基因活動(dòng)方式。

DNA甲基化意義： 

    靶序列上甲基基團(tuán)的存在可以影響轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，引起轉(zhuǎn)錄抑制，從而使該基因表達(dá)受到抑制。啟動(dòng)子區(qū)CPG島的甲基化常常可以抑制該基因的轉(zhuǎn)錄，尤其是對于抑癌基因，凋亡相關(guān)基因，DNA修復(fù)基因等，啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生甲基化會影響功能的發(fā)揮。不同的腫瘤組織基因甲基化狀態(tài)不一樣，可以作為早期檢測，監(jiān)測腫瘤形成的重要標(biāo)志物。對于某些特異基因的甲基化，更加重要，如DNA修復(fù)基因，可以引起對化療藥物的敏感，從而作為藥物治療療效的評價(jià)指標(biāo)，指導(dǎo)臨床用藥。

檢測方法： 

    甲基化特異性PCR、Northern印跡法、Western印跡法、免疫細(xì)胞化學(xué)等，這些檢測方法需要花費(fèi)大量時(shí)間，成本高，在臨床推廣應(yīng)用時(shí)均存在一定的困難。

    高分辨率熔解（High Resolution Melt,HRM）是一種最新的在表觀遺傳學(xué)中檢測 CpG 位點(diǎn)的一種新技術(shù)，主要是根據(jù)DNA序列的長度、GC含量、堿基互補(bǔ)性差異和特定飽和染料可以插入DNA雙鏈中的特性,應(yīng)用高分辨率的熔解曲線對樣品進(jìn)行分析，其分辨精度可以達(dá)到對單個(gè)堿基差異的區(qū)分。

DNA甲基化-HRM檢測原理： 

    甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析（MS-High Resolution Melting Curve Analyse）是一種不需要 PCR 產(chǎn)物后續(xù)操作的，簡單且靈敏的檢測基因甲基化水平的方法。該方法主要通過比較曲線的熔解溫度和峰形得以實(shí)現(xiàn)并且可以在一些列的 CpG 位點(diǎn)中檢測出單一的一個(gè)甲基化的發(fā)生，同時(shí)，也可以對一系列的 CpG 位點(diǎn)的甲基化水平進(jìn)行分析。單個(gè) CpG 位點(diǎn)的甲基化和平均的甲基化水平會對熔解曲線的形狀造成影響。采用重亞硫酸鹽處理 DNA 模板可以使 5-甲基胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶。在PCR反應(yīng)前，在非CpG島位置設(shè)計(jì)一對針對經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后DNA 鏈的引物，這對引物中間包含有意義的甲基化CpG島，一旦這些CpG島發(fā)生甲基化，使胞嘧啶（C）不發(fā)生變化，而與未甲基化的胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶（T），樣品中的 GC 含量發(fā)生了變化，最終被轉(zhuǎn)化成了熔解曲線 Tm 值之間的差異。 CpG 位點(diǎn)在小的擴(kuò)增片段內(nèi)的相對位置也會對熔解峰的形狀產(chǎn)生影響，因此，根據(jù)Tm值和熔解峰的形狀可以檢測出樣本的甲基化位點(diǎn)和甲基化程度。 

    HRM方法操作簡單、靈敏高、重復(fù)性高、成本低、不受檢測位點(diǎn)的局限高度等等優(yōu)勢，將對于遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)等方面的研究和臨床應(yīng)用提供更大的幫助。

我們的服務(wù)：

l 免費(fèi)的項(xiàng)目咨詢

l 客戶提供樣本DNA的分離、純化（可有為真公司代為提取）

l 根據(jù)客戶提供相關(guān)信息進(jìn)行引物設(shè)計(jì)、方案設(shè)計(jì)

l 亞硫酸氫鈉處理DNA并運(yùn)用HRM技術(shù)獲得特異溶解曲線

l 結(jié)果分析，出具實(shí)驗(yàn)報(bào)告，為臨床用藥提供依據(jù)

 

我們的優(yōu)勢：

蘇州為真生物在MS-HRM分析和研究方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，擁有開展MS-HRM研究的先進(jìn)儀器設(shè)備，具有自己獨(dú)到的研究策略和方法，能為你高效快速的進(jìn)行MS-HRM分析，找出有意義的CpG甲基化。

服務(wù)熱線：13913580076