HRM技術服務之突變檢測
基因突變是指由于DNA堿基對的置換、增添或缺失而引起的基因結構的變化。基因突變在生物界中是普遍存在的，它是生物變異的主要原因，是生物進化的主要因素。但大多數基因突變對生物體是有害的，如果發生基因突變，就有可能破壞這種協調關系。絕大多數的人類遺傳病如人的色肓、糖尿病、白化病等遺傳病，都是突變性狀，是由基因突變造成的，這些病對人類健康構成了嚴重威脅。
目前突變研究手段比較
大致有三大類
一類是以熒光共振能量傳遞為基礎的檢測方法，簡單的說就是以定量PCR為基礎的，比如Taqman探針法、分子信標（Molecular beacon）和FRET（HybProbe），應用這一類方法時需要對突變位點背景很清楚，針對特定的突變位點設計并合成序列/位點特異性探針。
第二類是以分子雜交技術為基礎的檢測方法，如寡核苷酸連接分析（OLA）和動態等位基因特異性雜交（DASH），這幾種方法也均涉及到序列特異性探針。
第三類是基于PCR技術與其它方法相結合的檢測方法，如變性-高效液相色譜（DHPLC）、SSCP（單鏈構象多態性）、DGGE（變性梯度凝膠電泳）、測序、Pyrosequencing和Ecotilling、芯片等技術，這幾種方法在PCR擴增的基礎上對產物過柱分析，或電泳分析，無需合成序列特異性探針，不受位點的局限，可對已知和未知突變進行操作。但DHPLC儀器昂貴，使用成本高，SSCP和DGGE通量相對較小、操作繁瑣、成本高、速度慢；測序是所有突變檢測的金標準，但測序的成本相當可觀；Pyrosequencing技術的突出優勢在于Pooling，適用于大規模的等位基因頻率分析，但需要特殊的儀器，硬件成本高；Ecotilling是一種在目標區段內篩查SNP的高通量、低成本的方法，但由于需要合成特定的紅外引物，所以在樣本量少、研究區段多的情況下就無法體現其優勢。
為真公司創新使用基于羅氏LightCycler 480的基因突變-HRM檢測技術。其特點為：高通量、簡單、快速、省錢、高靈敏度；閉管檢測，避免污染造成的假陽性；靈敏度和精確度達到近100；HRM分析和PCR是在同時進行，減少了額外儀器，無疑成本更低，特異性和精確度更好。
作為新一代的遺傳掃描工具，HRM具有“簡、效、快、廉”等其它技術難以比擬的優勢：
簡：無需序列特異性探針，不受堿基位點局限，同時檢出已知或未知突變、SNP和甲基化位點；閉管操作，避免交叉污染。
效：最低檢測0.1-0.01的突變或異常甲基化，檢測SNP靈敏度和特異性均為100。
快：1次同時檢測不多于384個樣本，在60-90分鐘內完成檢測。
廉：簡化操作步驟、降低人工和試劑成本，費用遠少于測序、Taqman探針等方法。
HRM技術特別適用于樣本量多、檢測位點較少的SNP、突變或甲基化分析，是不同于基因芯片檢測方法（檢測位點多，樣本少）的高通量方法。同時，也是基因芯片篩選后的多個基因在更多標本中驗證的最佳方法。
突變-HRM檢測技術原理：
在一定的溫度范圍內將PCR擴增的產物進行變性，期間實時檢測體系內熒光信號。熒光值隨著溫度變化，可繪制溶解曲線。每一段DNA都有其獨特的序列，因而也就有了獨特的熔解曲線形狀，如同DNA指紋圖譜一樣，具有很高的特異性、穩定性和重復性。根據曲線準確區分野生型和突變型基因。
HRM高分辨率熔解曲線示意圖
不同的基因型表現為不同的HRM熔解曲線形狀
我們的服務：
免費的項目咨詢
客戶提供樣本DNA的分離、純化（可有為真公司代為提取）
根據客戶提供相關信息進行引物設計、方案設計
處理DNA并運用HRM技術獲得特異溶解曲線
結果分析，出具實驗報告，為臨床用藥提供依據
蘇州為真生物在基因突變分析和研究方面積累了豐富的經驗，擁有開展突變研究的先進儀器設備，具有自己獨到的研究策略和方法，能有效挖掘資源，能為你高效快速的進行突變位點檢測。
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