產(chǎn)品簡介：

Ø 細胞凋亡－Hoechst染色試劑盒(Apoptosis, Hoechst Staining Kit)為您提供了一種快速簡便的細胞凋亡檢測方法。細胞發(fā)
生凋亡時，染色質(zhì)會固縮。所以Hoechst染色時，細胞核會呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，參見本頁照片（貼壁細胞）。

Ø 只需25分鐘即可完成細胞凋亡檢測。

Ø 本試劑盒提供了固定液，染色液，及抗熒光淬滅封片液。

Ø 對貼壁細胞，懸浮細胞和組織切片均適用。

Ø 足夠檢測100個樣品。



包裝清單：

固定液 50 ml
Hoechst 33258染色液 50 ml
抗熒光淬滅封片液 5 ml
說明書 1 份




保存條件：

4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本試劑盒自訂購之日起六個月內(nèi)有效。


注意事項：

Ø 需可以觀察藍色熒光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。

Ø 需PBS或0.9%NaCl溶液。

Ø 需蓋玻片與載玻片。蓋玻片與載玻片可以向碧云天訂購。

Ø 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。可以向碧云天選購各種型號的載玻片存儲盒。

Ø 在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1. 貼壁細胞

A. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用細胞培養(yǎng)級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再
用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。

B. 刺激細胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。

D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

F. 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。

G. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長在350nm左右，發(fā)射波長在460nm左右，詳細圖譜請參考下圖。

2. 懸浮細胞

A. 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

B. 離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動晃動。

C. 最后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。

D. 稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。

E. 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。

F. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
G. 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長在350nm左右，發(fā)射波長在460nm左右，詳細圖譜請參考下圖。

3. 組織切片

A. 對于任何常見切片，處理至常規(guī)可以進行免疫染色時，或完成常規(guī)的免疫染色后，即可進行后續(xù)的Hoechst染色。

B. PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。可在六孔板中操作。

C. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動。

D. 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
E. 將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

F. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長在350nm左右，發(fā)射波長在460nm左右，詳細圖譜請參考下圖。


Hoechst 33258的吸收光譜和發(fā)射光譜，左側(cè)峰為吸收光譜，右側(cè)峰為發(fā)射光譜。

使用本產(chǎn)品的文獻：
1. Li-Xin Zhu, Jing Liu, You-Hua Xie, Yu-Ying Kong, Ye Ye, Chun-Lin Wang, Guang-Di Li, Yuan Wang.
Expression of hepatitis C virus envelope protein 2 induces apoptosis in cultured mammalian cells.
World J Gastroenterol, 2004;10(20):2972-2978. (Impact factor: 3.318)

注：本文由中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生化細胞所汪垣教授實驗室發(fā)表，汪垣教授1986年與1992年兩次獲中國科學(xué)院科技進步一等獎，1989年獲國家自然科學(xué)二等獎，1992年獲北京國際發(fā)明展金獎，世界知識產(chǎn)權(quán)組織授予的婦女發(fā)明金獎，1993年獲上海市第二屆科技博覽會金獎，1993年獲國家科技進步一等獎。1993年獲上海市科技進步一等獎。1994年獲上海市科技進步二等獎。1995年獲上海市科技進步獎二等獎。2001年獲中國科學(xué)院首屆十大女杰稱號。2002年被授予首屆“新世紀巾幗發(fā)明家”。1996年被評為中國科學(xué)院優(yōu)秀研究生導(dǎo)師。2001年獲中科院“寶潔”優(yōu)秀研究生導(dǎo)師獎。


2. Xin-xin Zhao, Li-juan Zhao, Wei-guo Xiao, Jing Lu, Pin-ting Yang and Qing-hong Yu.
C-myc antisense oligodexoynucleotides inhibite synoviocytes proliferation and induce synoviocytes apoptosis.
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Effects of radizx astragali on the nitric oxides, free radicals and apoptosis of thymus in aging mice.
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4. Meishu Shen and Wangxi Li.

Effect of angelica on apoptosis in brain cell and thymus index of aging mice.
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5. Yingchao Nie, Qian Wang, Changyong Liang, Minggang Fang, Zehua Yu, Xinwen Chen.
Characterization of ORF2 and its encoded protein of the Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus.
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6. Yao G, Yang L, Hu Y, Liang J, Liang J, Hou Y.
Nonylphenol-induced thymocyte apoptosis involved caspase-3 activation and mitochondrial depolarization
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7. Zhu Chunlei, Zhang Chaodong and Wang Yunjie.
The study of apoptosis induced by methylene blue (MB) on C6 cell and MB enhances BCNU therapy of experimental rat C6 glioma.
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