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使用說(shuō)明





支原體染色檢測(cè)試劑盒




產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝 價(jià)格
C0296 支原體染色檢測(cè)試劑盒 >100次 196.00元







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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø 支原體染色檢測(cè)試劑盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是用于在培養(yǎng)細(xì)胞中原位染色檢測(cè)支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在支原體污染。
Ø 培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)，但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，必須通過(guò)特定的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。
Ø 檢測(cè)支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測(cè)、RT-PCR檢測(cè)以及DNA熒光染色檢測(cè)。上述檢測(cè)方法中，除DNA熒光染色檢測(cè)外操作步驟相對(duì)比較煩瑣并且所需時(shí)間較長(zhǎng)。本支原體染色檢測(cè)試劑盒是通過(guò)Hoechst染色來(lái)檢測(cè)支原體的。本試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測(cè)支原體污染。


Ø 本試劑盒的檢測(cè)效果圖參考上圖。左圖為無(wú)支原體污染情況，中圖為支原體輕度污染情況，箭頭所指為微粒狀的一些支原體，右圖為支原體重度污染情況，可見(jiàn)大量微粒狀的支原體。
Ø 如果發(fā)現(xiàn)有支原體污染，建議更換無(wú)污染的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。
Ø 本試劑盒如用于六孔板樣品檢測(cè)，至少可以檢測(cè)100個(gè)樣品。





包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 包裝
C0296-1 固定液 100ml
C0296-2 Hoechst染色液 10ml
C0296-3 抗熒光淬滅封片液 10ml
— 說(shuō)明書(shū) 1份





保存條件：

4℃保存，一年有效，其中Hoechst染色液需避光保存。



注意事項(xiàng)：

Ø Hoechst染色試劑對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
Ø 固定液含有乙酸，有刺激性氣味，宜在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行固定操作。
Ø 熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
Ø 檢測(cè)支原體前最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2-3代，這樣更容易檢測(cè)出支原體，因?yàn)橐恍┛股�素可以抑制支原體生長(zhǎng)。
Ø 需自備PBS。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



使用說(shuō)明：


1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞，在六孔板或其它多孔板內(nèi)或蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞至50%-80%滿(mǎn)。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)滿(mǎn)會(huì)導(dǎo)致很難判斷是否存在支原體污染。
b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心沉淀細(xì)胞，取少量細(xì)胞做細(xì)胞涂片，空氣中充分晾干。
2. 用PBS按照1:10稀釋Hoechst染色液(1體積Hoechst染色液加入9體積PBS)。
稀釋后的Hoechst染色液宜在24小時(shí)內(nèi)使用。
3. 加適量固定液固定10-20分鐘。
對(duì)于六孔板的一個(gè)孔，加入1ml固定液。確保固定液充分覆蓋樣品，固定前切勿對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌。另外對(duì)于貼壁細(xì)胞，固定前需去除培養(yǎng)液。
4. 去除固定液，空氣中晾干。
5. 加適量10倍稀釋的Hoechst染色液室溫染色10-30分鐘。
對(duì)于六孔板的一個(gè)孔，加入1ml染色液。確保染色液充分覆蓋樣品，染色時(shí)注意避光。可以用鋁箔紙避光。
6. 去除染色液，空氣中晾干。
7. 滴加試劑盒中提供的抗熒光淬滅封片液，封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察藍(lán)色熒光。
熒光顯微鏡觀(guān)察時(shí)需400倍或1000倍放大觀(guān)察(需使用油鏡)。參考上圖判斷支原體污染情況。沒(méi)有支原體污染或其它原核生物污染的細(xì)胞樣品，僅觀(guān)察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光，線(xiàn)粒體DNA不會(huì)被染色。有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀(guān)察到細(xì)胞核周?chē)�微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀(guān)察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。有細(xì)菌、酵母或霉菌污染的情況雖然Hoechst染色也會(huì)呈陽(yáng)性，但細(xì)菌、酵母或霉菌污染在光學(xué)顯微鏡下可以觀(guān)察到，而支原體觀(guān)察不到，由此可以初步區(qū)分是支原體還是其它微生物。如有必要進(jìn)一步鑒定，可以通過(guò)把支原體接種培養(yǎng)和RT-PCR等方法進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。