產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø 生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)生生物素標(biāo)記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標(biāo)記的生物素DNA探針可以用于常規(guī)的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。
Ø 在Klenow酶(Klenow fragment,3’-5’exo-)催化下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)(random prime labeling)可以把生物素標(biāo)記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產(chǎn)生生物素標(biāo)記的DNA探針。在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)過程中，一些標(biāo)記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅(qū)趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)，最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標(biāo)記DNA探針，可多達(dá)1-15倍左右。
Ø 本試劑盒可以用于多種DNA模板的標(biāo)記，包括DNA片斷、線性化的質(zhì)粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片斷應(yīng)不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用碧云天生產(chǎn)的生物素3''末端DNA標(biāo)記試劑盒(D3106)進(jìn)行DNA探針標(biāo)記。
Ø 用于本試劑盒的模板DNA的量應(yīng)不少于10ng，推薦的模板用量為100ng-1微克。
Ø 本試劑盒中提供了已經(jīng)用生物素標(biāo)記好的Biotin-Control DNA，可以用作檢測(cè)生物素DNA探針標(biāo)記效率的對(duì)照。
Ø 生物素標(biāo)記DNA可以使用碧云天生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
Ø 本試劑盒可以用于10個(gè)標(biāo)記反應(yīng)。


包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝

D3118-1
Random Primer in Buffer(5X)
105微升

D3118-2
Klenow Fragment
11微升

D3118-3
Biotin-Labeling Mix
50微升

D3118-4
Ultrapure Water
1毫升

D3118-5
Biotin-Control DNA(3ng/微升)
50微升

D3118-6
探針標(biāo)記終止液
100微升

—
說明書
1份





保存條件：

-20℃保存。



注意事項(xiàng)：

Ø 需自備用于探針標(biāo)記效率檢測(cè)的相關(guān)試劑。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用說明：

1. 在一離心管或PCR管內(nèi)加入100ng-1微克DNA模板，再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water，至總體積為34微升。
說明：通常100-300ng DNA模板已經(jīng)足夠用于一次標(biāo)記反應(yīng)。
2. 加入10微升Random Primer in Buffer(5X)，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設(shè)置100℃，99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5微升Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1微升Klenow Fragment，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時(shí)或過夜(不宜超過20小時(shí))。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標(biāo)記DNA的產(chǎn)量，因此推薦孵育過夜(12-20)小時(shí)。
8. 加入3微升探針標(biāo)記終止液，混勻，終止標(biāo)記反應(yīng)。至此標(biāo)記反應(yīng)已經(jīng)全部完成，標(biāo)記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時(shí)探針可以直接用于探針標(biāo)記效率的檢測(cè)及Southern、Northern等后續(xù)操作。
10. 整個(gè)探針標(biāo)記反應(yīng)的流程參見下表：
100ng-1微克DNA模板
x微升

Ultrapure Water
(34-x)微升

Random Primer in Buffer(5X)
10微升

100℃ 5分鐘，立即冰浴冷卻

Biotin-Labeling Mix
5微升

Klenow Fragment
1微升

總體積
50微升

37℃孵育過夜

探針標(biāo)記終止液
3微升

-20℃保存

此時(shí)可用于標(biāo)記效率的檢測(cè)及Southern、Northern等后續(xù)檢測(cè)


11. 探針標(biāo)記效率的檢測(cè)：可以對(duì)標(biāo)記好的探針進(jìn)行適當(dāng)梯度稀釋后，使用碧云天生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢測(cè)。通常探針的標(biāo)記效率可以參考下表：
模板DNA量
生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)量

－
孵育1小時(shí)
孵育20小時(shí)

10ng
80ng
900ng

30ng
150ng
1350ng

100ng
350ng
1650ng

300ng
750ng
2200ng

1000ng
1300ng
2600ng

3000ng
1600ng
2600ng


注意：具體的探針標(biāo)記效率還和模板DNA的長(zhǎng)度、純度等因素有關(guān)，上表的數(shù)值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標(biāo)記DNA的長(zhǎng)度通常在數(shù)百bp左右。具體的長(zhǎng)度因模板的長(zhǎng)度而有所不同。例如模板DNA的長(zhǎng)度為1kb，則生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)物的長(zhǎng)度通常為100-1000bp，平均長(zhǎng)度約為300bp左右。