tRF&tiRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)

實時熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光試劑，利用熒光信號實時檢測PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

服務(wù)類別：	分子與細胞	總訪問：	1057
最后更新：	2018-11-26	半年訪問：	76
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服務(wù)商：上海康成生物工程有限公司

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服務(wù)介紹
公司簡介

實時熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光試劑，利用熒光信號實時檢測PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ�、靈敏、快速、高重復(fù)性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產(chǎn)生，長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短，且與tRNA序列完全重疊，不能通過傳統(tǒng)的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列（adaptor），設(shè)計特殊的跨連接位點的定量PCR引物，可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。

康成生物為您提供tRF & tiRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)，您只需要提供保存完好的組織或細胞標本，本公司專業(yè)的技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成tRF & tiRNA實時定量PCR實驗操作和數(shù)據(jù)分析，提供給您完整的實驗報告，為您節(jié)省大量的時間和精力。

圖1. 雙端接頭法保證了tRF & tiRNA PCR產(chǎn)物的高特異性。

康成生物tRF & tiRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)流程

1. 引物設(shè)計、合成
設(shè)計并合成目的tRF & tiRNA的特異性PCR引物。
2. 樣品RNA抽提
a. 若實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。
b. 若實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×10⁶～1×10⁷細胞，完全吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3. RNA質(zhì)量檢測
a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。

b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。
注：用于tRF & tiRNA實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase 污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.RNA預(yù)處理（可選）

使用rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Kit (Cat# AS-FS-005, Arraystar)進行預(yù)處理，去除3’氨�；┒伺c3‘環(huán)磷酸末端，磷酸化5’羥基末端，并移去m1A, m3C等多種甲基化修飾。

注：tRNA上存在大量的轉(zhuǎn)錄后修飾，而且tRNA需與氨基酸形成氨酰基tRNA方可參與蛋白翻譯。當tRNAs被切割為tRFs&tiRNAs時，這些修飾（包括甲基化修飾、氨�；┒诵揎棧⿻炕虿糠值谋Ａ粝聛怼�tiRNAs常由RNA內(nèi)切酶Angiogenin切割產(chǎn)生，這類內(nèi)切酶會在切割位點產(chǎn)生5‘羥基（5’-OH）末端與3’環(huán)磷酸（3‘-cP）末端。然而，5’端與3‘端的接頭連接步驟，需要底物小RNA 5’端為磷酸，3‘端為羥基。此外，某些tRFs&tiRNAs的內(nèi)部修飾比如m1A, m1G與m3C會嚴重阻礙反轉(zhuǎn)錄過程。因此為了準確檢測tRFs&tiRNAs，這些修飾必須被有效的去除。

4. 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
使用rtStar™ First-Strand cDNA Synthesis Kit (3’ and 5’ adaptor) (Cat# AS-FS-003, Arraystar) 試劑盒進行接頭連接和反轉(zhuǎn),合成cDNA第一鏈。
5. 實時定量PCR
以合成的cDNA作為模板進行實時定量PCR擴增，梯度稀釋的標準同時進行實時定量PCR擴增，根據(jù)Ct值制備標準曲線。以同樣的方法測定每個樣品中的內(nèi)參，校正上樣誤差。
6. 分析結(jié)果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結(jié)果，根據(jù)標準曲線定量樣品中的目的tRF & tiRNA。提供實驗報告，包括詳細的實驗方法，實時定量PCR實驗數(shù)據(jù)和圖表。

上海康成生物工程有限公司自2002年起專注于生物科研技術(shù)服務(wù)，是國內(nèi)最早一批專業(yè)提供生命科學(xué)前沿研究技術(shù)服務(wù)的高科技企業(yè)。為進一步拓展在醫(yī)學(xué)科研服務(wù)領(lǐng)域業(yè)務(wù)的深度和廣度，向多譜領(lǐng)域發(fā)展，重塑品牌 Aksomics（數(shù)譜生物）。Aksomics全面整合公司在非編碼RNA（lncRNA、circRNA、small RNA等）、表觀遺傳學(xué)、蛋白組學(xué)等檢測方向的核心技術(shù)，依靠自身優(yōu)秀的研發(fā)、技術(shù)、營銷和服務(wù)團隊，憑借國際領(lǐng)先的技術(shù)平臺和高標準的質(zhì)控體系，形成了涵蓋表觀基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)等各個研究領(lǐng)域的一站式技術(shù)平臺。

【表觀基因組學(xué)】 DNA甲基化芯片、DNA羥甲基化芯片、染色質(zhì)免疫共沉淀芯片、DNA甲基化測序、DNA羥甲基化測序、染色質(zhì)免疫共沉淀測序、MeDIP-PCR、hMeDIP-PCR、ChIP-PCR等

【轉(zhuǎn)錄組學(xué)】LncRNA芯片、LncPath™芯片、環(huán)狀RNA芯片、T-UCR芯片、microRNA芯片、piRNA芯片、全基因組表達譜芯片、RNA測序、RNA m6A甲基化測序、small RNAs測序系列（microRNA測序、tRF&tiRNA測序、snoRNA測序、piRNA測序等）、LC-MS tRNA修飾檢測、 nrStar™ ncRNA PCR芯片（tRF&tiRNA，tRNA，snoRNA，F(xiàn)unctional LncRNA）、miRStar™癌癥特異性microRNA PCR芯片、NuRNATM mRNA PCR芯片、功能分類PCR芯片、LncRNA實時定量PCR、環(huán)狀RNA實時定量PCR、tRF&tiRNA實時定量PCR、microRNA實時定量PCR、mRNA實時定量PCR

【蛋白組學(xué)平臺】TMT標記定量蛋白組學(xué)服務(wù)、Lable-free定量蛋白組學(xué)服務(wù)、磷酸化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、泛素化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、N-糖基化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、乙�；揎椀鞍捉M學(xué)服務(wù)、蛋白-蛋白相互作用組學(xué)

【代謝組學(xué)】靶向代謝組學(xué)、非靶向代謝組學(xué)

【外泌體組學(xué)】外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)、外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)、外泌體代謝組學(xué)
康成生物為Agilent、Arraystar、Exiqon、Illumina、Qiagen、Thermo Fisher等國際知名品牌提供技術(shù)服務(wù)。康成客戶采用各類技術(shù)服務(wù)發(fā)表的SCI論文已超560篇�？党缮飳⒊掷m(xù)聚焦生命科學(xué)發(fā)展的挑戰(zhàn)，提供有競爭力的產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價值。

聯(lián)系方式：
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